Активация тромбоцитов сопровождается конформационной перестройкой интегринов αIIbβ3, приводящей к увеличению их сродства к фибриногену. Связывание фибриногена вызывает дополнительную конформационную перестройку αIIbβ3 и взаимодействие цитоплазматических концов этих рецепторов со структурами цитоскелета.

Цель работы. Изучить кинетику ассоциации интегринов αIIbβ3 с актиновым цитоскелетом в динамике агрегации тромбоцитов.

Материалы и методы. В исследовании использованы образцы цитратной крови взрослых здоровых добровольцев. Агрегацию тромбоцитов индуцировали добавлением 25 мкмоль/л TRAP (пептида, активирующего рецептор тромбина) к обогащённой тромбоцитами плазме (ОТП). Образцы ОТП лизировали добавлением буфера, содержащего Triton X-100, и центрифугировали при 10000g. Полученный осадок (цитоскелетную фракцию) подвергали электрофорезу в полиакриламидном геле с додецилсульфатом натрия и далее — иммуноблоттингу с использованием моноклональнах антител против β-актина и αIIb. Иммунореактивные полосы выявляли методом усиленной хемилюминесценции. Уровень сигнала выражали в процентах (за 100% принимали значения для 15-минутной агрегации). Представлены среднее и стандартное отклонение.

Результаты. Добавление TRAP вызывало одноволновую высокоамплитудную агрегацию тромбоцитов (степень агрегации — 84.1 ± 7.2%) с быстрым выходом на плато, которое продолжалось не менее 15 мин. В состоянии функционального покоя тромбоцитов (до добавления TRAP) в цитоскелетной фракции содержалось 63.5 ± 9.9% актина и 4.3 ± 2.6% αIIb. Агрегация тромбоцитов сопровождалась быстрым увеличением количества актина в цитоскелетной фракции, которое уже через 1 мин после добавления агониста статистически значимо не отличалось от 100% (P > 0,05; одновыборочный t-критерий) и сохранялось на этом уровне ещё не менее 15 мин. Количество αIIb через 1 мин после добавления агониста увеличивалось до 40.2 ± 20.1%, через 3 мин — до 75.8 ± 13.2%, а через 5 и 10 мин не отличался от 100%.

Выводы. TRAP-индуцированная агрегация тромбоцитов сопровождается быстрой полимеризацией актина и постепенной ассоциацией интегринов αIIbβ3 с цитоскелетом.